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液相色譜法與液相色譜儀

更新時間：2017-02-15 點擊次數(shù)：2601

液相色譜法是20世紀(jì)60年代末在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種現(xiàn)代色譜分析方法，歷*曾出現(xiàn)過不同的叫法，如，高壓液相色譜（HPLC）、高速液相色譜（HSLC）和高分辨液相色譜（HRLC）。就分離原理而言，HPLC與經(jīng)典柱層析（色譜）沒有本質(zhì)的區(qū)別，但由于采用了高壓輸液泵、微粒固定相和高靈敏度檢測器，HPLC在分析速度、分離效率、檢測靈敏度和操作自動化方面，都達(dá)到了可與GC相比的程度，并保持了樣品適用范圍廣、流動相種類多和便于制備的柱層析優(yōu)點，在生物工程、制藥工業(yè)、食品工業(yè)、環(huán)境監(jiān)測和石油化工等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用！ HPLC的特點：①樣品適用范圍廣；②分離效率高；③檢測靈敏度高；④分析速度快；⑤樣品回收方便；液相色譜法的分類：HPLC的分類方法有多種，比較常見的有三種：（1）按照分離機(jī)理分類：①吸附色譜②分配色譜③離子交換色譜（IEC）④體積排阻色譜（SEC）⑤親和色譜（AC）（2）按照色譜柱洗脫動力學(xué)分類:①洗脫法②前沿法③置換法（3）按照分離目的分類：①分析液相色譜②制備液相色譜 HPLC分析常用的樣品處理技術(shù):粉碎、冷凍干燥、氣體萃取（頂空分析和吹掃-捕集）、溶劑萃?。ɑ亓骰蛩魇陷腿?，加壓溶劑萃取）、固相萃取、固相微萃取、超臨界流體萃取、微波萃取、超聲波萃取、微透析、衍生化、膜分離、蒸餾、吸附、離心、過濾、濃縮和溶解等。色譜定性分析方法標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照定性；利用文獻(xiàn)數(shù)據(jù)定性；利用選擇性檢測器定性；在線聯(lián)用儀器定性；其它定性方法；液相色譜儀使用及維護(hù)方法液相色譜儀使用時要非常注意！使用卡套柱時，兩端的卡套應(yīng)時刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時候都不能將卡套取下來，否則會造成填料的流失。液相色譜柱使用注意：卡套柱的安裝（加預(yù)柱）：將卡套架套入柱芯將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片將“子彈頭"預(yù)柱放入卡套片內(nèi)將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊然后依同樣的順序連接好柱子的另一端平衡色譜柱反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析樣品之前，應(yīng)使用10～20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水“過渡"。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請在使用流動相之前用乙醇或異丙醇平衡如何平衡色譜柱？平衡過程中，將流速緩慢地提高用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時間來平衡）色譜柱的再生。。。進(jìn)行色譜柱再生時，應(yīng)使用一個廉價的泵，我們建議不使用您的液相色譜儀上的泵。注意：在對NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此，應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液*流出。如果簡單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。液相色譜的常用術(shù)語1.色譜曲線（chromatogram）：在色譜法中，當(dāng)樣品加入后，樣品中各組分隨著流動相的不斷向前移動而在兩相間反復(fù)進(jìn)行溶解、揮發(fā)，或吸附、解吸的過程。如果各組分在固定相中的分配系數(shù)（表示溶解或吸附的能力）不同，就有可能達(dá)到分離。分配系數(shù)小的組分滯留在固定相中的時間短，在柱內(nèi)移動的速度快，先流出柱子；分配系數(shù)大的組分滯留在固定相中的時間長，在柱內(nèi)移動的速度慢，后流出柱子；分離后的各組分經(jīng)檢測器轉(zhuǎn)換成電信號而記錄下來，得到一條信號隨時間變化的曲線，稱為色譜流出曲線或 “色譜峰"，理想的色譜流出曲線應(yīng)該是正態(tài)分布曲線。2.（色譜）峰（chromatographic peak）：色譜柱流出組分通過檢測器系統(tǒng)時所產(chǎn)生的響應(yīng)信號的微分曲線。3.峰底（peak base）：峰的起點與終點之間的連接的直線。4.峰高（h，peak height）：色譜峰zui大值點到峰底的距離。5.峰寬（W ，peak width）：在峰兩側(cè)拐點處所作切線與峰底相交兩點的距離。6.半高峰寬（Wh/2 ，peak with d at half height）：通過峰高的中點作平行于峰底的直線，此直線與峰兩側(cè)相交兩點之間的距離（圖1 中的HJ）。7.峰面積（A ，peak area）：峰與峰底之間的面積（圖1中的CHEJDC）。8.拖尾峰（tailing peak）：后沿較前沿平緩的不對稱的峰。9.前伸峰（leading peak）：前沿較后沿平緩的不對稱的峰。（又叫伸舌峰、前延峰）10.假峰（ghost peak）：除組分正常產(chǎn)生的色譜峰外，由于儀器條件的變化等原因而在譜圖上出現(xiàn)的色譜峰，即并非由試樣所產(chǎn)生的峰。這種色譜峰并不代表具體某一組分，容易給定性、定量帶來誤差。（又叫鬼峰）11.畸峰（distrorted peak）：形狀不對稱的色譜峰，前伸峰、拖尾峰都屬于這類。 12.反峰（negative peak）：也稱倒峰、負(fù)峰，即出峰的方向與通常的方向相反的色譜峰。

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